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含阿胶中成药造假将终结中食药检院发布马皮等杂皮检测方式及特征肽含量方法

202 阅读量 | 分类：阿胶行业新闻-阿胶行业/企业协会新闻 | 时间：2020年04月18日 00:00

4月8日，中国食品药品检定研究院发布《国家药品抽检探索性研究情况（第六期）》，其中涉及当归养血丸品种中阿胶的鉴别方法和阿胶特征多肽的含量测定方法；妇康宝口服液中阿胶液质鉴别方法及阿胶中掺伪马源成分的液质鉴别方法；定坤丹中驯鹿源特征肽检查方法、马源寡肽A检查方法；龟甲胶特征离子、阿胶特征离子的鉴别方法和牛皮源、驴皮源、猪皮源和马皮源成分的检查方法等。

含阿胶中成药造假将终结中食药检院发布马皮等杂皮检测方式及特征肽含量方法假阿胶第1张

含阿胶中成药造假将终结中食药检院发布马皮等杂皮检测方式及特征肽含量方法假阿胶第1张

按照国家药品监督管理局药品监督司的要求，各承检机构基于法定标准检验，以问题为导向，针对可能影响药品内在质量的处方、原辅料、生产工艺、包装材料等方面的相关因素，开展探索性研究，建立或参照国家药品标准以外的检验项目和检测方法，深入挖掘药品质量风险。

其中，深圳市药品检验研究院通过探索性研究，采用高效液相色谱-质谱法，建立了当归养血丸品种中阿胶的鉴别方法和阿胶特征多肽的含量测定方法，提示有关生产企业可参考关注药品相关项目；

（1）当归养血丸中阿胶的高效液相色谱-质谱法鉴别

取本品适量，研细，取1.70g，置50ml量瓶中，加1%碳酸氢铵溶液40ml，超声处理30分钟使溶散，加1%碳酸氢铵溶液稀释至刻度，摇匀，离心（3500转/分钟）5分钟，将上清液转移至另一离心管中，再离心（3500转/分钟）5分钟，取上清液，用0.45μm微孔滤膜滤过，取续滤液，再用0.22μm微孔滤膜滤过，取续滤液100μl，置微量进样瓶中，加胰蛋白酶溶液（取序列分析级胰蛋白酶，加1%碳酸氢铵溶液制成每1ml含1mg的溶液，临用新制）10μl，摇匀，37℃恒温酶解12小时，作为供试品溶液。另取阿胶对照药材0.1 g，置50ml量瓶中，加1%碳酸氢铵溶液40ml，超声处理30分钟，使样品完全溶解，加1%碳酸氢铵溶液稀释至刻度，摇匀，自“用0.22μm微孔滤膜滤过”起，同法制成对照药材溶液。照高效液相色谱-质谱法（《中国药典》2015年版四部通则0512和通则0431）试验，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂（色谱柱内径为2.1mm）；以乙腈为流动相A，以0.1%甲酸溶液为流动相B，按下表中的规定进行梯度洗脱，流速为每分钟0.3m1。采用质谱检测器，电喷雾正离子模式（ESI+），进行多反应监测（MRM），选择质荷比（m/z）539.8（双电荷）→612.4和539.8（双电荷）→923.8作为检测离子对。取阿胶对照药材溶液，进样5μl，按上述检测离子对测定的MRM色谱峰的信噪比均应大于3:1。

吸取阿胶对照药材溶液 5μl，注入高效液相色谱-质谱联用仪，测定。以质荷比（m/z）539.8（双电荷）→612.4和539.8（双电荷）→923.8离子对提取的供试品离子流色谱中，应同时呈现与阿胶对照药材色谱保留时间一致的色谱峰。

含阿胶中成药造假将终结中食药检院发布马皮等杂皮检测方式及特征肽含量方法假阿胶第2张

含阿胶中成药造假将终结中食药检院发布马皮等杂皮检测方式及特征肽含量方法假阿胶第2张

（2）高效液相色谱-质谱法测定当归养血丸中阿胶特征多肽的含量

【含量测定】阿胶照《中国药典》2015年版四部高效液相色谱-质谱法（通则 0512 和通则 0431）测定。

色谱、质谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂（色谱柱内径为2.1mm）；以乙腈为流动相A，以0.1%甲酸溶液为流动相B，按下表中的规定进行梯度洗脱，流速为每分钟0.3m1。

含阿胶中成药造假将终结中食药检院发布马皮等杂皮检测方式及特征肽含量方法假阿胶第3张

含阿胶中成药造假将终结中食药检院发布马皮等杂皮检测方式及特征肽含量方法假阿胶第3张

采用三重四级杆质谱检测器，电喷雾正离子模式（ESI）正离子模式下多反应监测（MRM），监测离子对见表：

含阿胶中成药造假将终结中食药检院发布马皮等杂皮检测方式及特征肽含量方法假阿胶第4张

理论板数按驴源多肽A1峰计算应不低于4000。

对照品溶液的制备取驴源多肽A1对照品和驴源多肽A2对照品适量，精密称定，加1%碳酸氢铵溶液制成每1ml各含2.5μg的混合溶液，即得。

供试品溶液的制备取本品粉末约1.70g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入1%碳酸氢铵溶液25ml，称定重量，超声处理60分钟，再称定重量，用1%碳酸氢铵溶液补足减失的重量，离心（3500转/分钟）5分钟，将上清液转移至另一离心管中，再离心（3500转/分钟）5分钟，取上清液，用0.45μm微孔滤膜滤过，取续滤液，再用0.22μm微孔滤膜滤过，精密量取续滤液1ml，置5ml量瓶中，加胰蛋白酶溶液（取序列分析级胰蛋白酶，加1%碳酸氢铵溶液制成每1ml含1mg的溶液，临用新配）1ml，加1%碳酸氢铵溶液稀释至刻度，摇匀，37℃恒温酶解12小时，滤过，取续滤液，即得。

测定法精密量取对照品溶液1、2、5、10、20、25ml，分别置50ml量瓶中，加1%碳酸氢铵溶液稀释至刻度，摇匀，制成标准曲线溶液。分别精密吸取不同浓度的标准曲线溶液与供试品溶液各5μl，注入高效液相色谱-质谱联用仪，以对照品峰面积为纵坐标，对照品浓度为横坐标制备标准曲线。从标准曲线读出供试品溶液中驴源多肽A1和驴源多肽A2的浓度，计算，即得。

本品每1g含阿胶以驴源多肽A1和驴源多肽A2的总量计，不得少于78μg。

天津市药品检验研究院通过探索性研究，建立了妇康宝口服液中阿胶液质鉴别方法及阿胶中掺伪马源成分的液质鉴别方法，提示有关生产企业可参考该方法关注药品中阿胶品质的项目；

妇康宝口服液中阿胶检验方法

精密吸取本品1ml，置50ml量瓶中，加1%碳酸氢铵溶液稀释至刻度，充分摇匀，用0.22μm微孔滤膜滤过，取续滤液100μl，置微量进样瓶中，加胰蛋白酶溶液10μl（取序列分析用胰蛋白酶，加1%碳酸氢铵溶液制成每1ml中含1mg的溶液，临用前现配），摇匀，37℃恒温酶解12小时，作为供试品溶液。另取阿胶对照药材0.1g，精密称定，置50ml量瓶中，加1%碳酸氢铵溶液40ml，超声处理（功率250W，频率40kHz）30分钟，加1%碳酸氢铵溶液稀释至刻度，摇匀，用0.22μm微孔滤膜滤过，同法制成对照药材溶液。照高效液相色谱-质谱法（中国药典2015年版四部通则0512和0431）试验，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂（色谱柱内径为2.1mm）；以乙腈为流动相A，以0.1%甲酸溶液为流动相B，按下表中的规定进行梯度洗脱，流速为每分钟0.3ml；采用质谱检测器，电喷雾正离子模式（ESI+），进行多反应监测（MRM），选择质荷比（m/z）539.8（双电荷）→612.4和m/z 539.8（双电荷）→923.8作为检测离子对。取阿胶对照药材溶液，进样5μl，按上述离子对测定的MRM色谱峰的信噪比均应大于3：1。

含阿胶中成药造假将终结中食药检院发布马皮等杂皮检测方式及特征肽含量方法假阿胶第5张

含阿胶中成药造假将终结中食药检院发布马皮等杂皮检测方式及特征肽含量方法假阿胶第5张

吸取供试品溶液各5μl，注入高效液相色谱-质谱联用仪，测定。以质荷比（m/z）539.8（双电荷）→612.4和m/z 539.8（双电荷）→923.8离子对提取的供试品离子流色谱中，应同时呈现与对照药材色谱保留时间一致的色谱峰。

妇康宝口服液中阿胶掺伪马源成分检验方法

精密吸取本品1ml，置50ml量瓶中，加1%碳酸氢铵溶液稀释至刻度，充分摇匀，用0.22μm微孔滤膜滤过，取续滤液100μl，加入胰蛋白酶溶液（取序列分析用胰蛋白酶，加1%碳酸氢铵溶液制成每1 mL中含2 mg的溶液，临用前现配）10 μL，混匀，37 ℃恒温酶解12小时，作为供试品溶液。另取阿胶对照药材0.10 g，置50 mL量瓶中，加1%碳酸氢铵溶液40 mL，超声处理30 min，使样品完全溶解，加1%碳酸氢铵溶液稀释至刻度，摇匀，作为阿胶基质溶液。再取马源寡肽A对照品适量，精密称定，加阿胶基质溶液，制成每1mL含0.2μg马源寡肽A的对照品溶液，摇匀，作为对照品溶液。照高效液相色谱-质谱法（中国药典2015年版四部通则0512和0431）试验，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂（色谱柱内径为2.1mm）；以乙腈为流动相A，以0.1%甲酸溶液为流动相B，按下表中的规定进行梯度洗脱，流速为0.3 mL/min；以质谱作为检测器，电喷雾离子源：ESI+，选择质荷比（m/z）386.3（双电荷）→377.2和m/z386.3（双电荷）→322.2作为检测离子对进行多反应监测（MRM）。

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